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      小鼠神經(jīng)元細胞提取物細胞培養(yǎng)方法

      更新時間:2021-06-17      點擊次數(shù):1223

      小鼠神經(jīng)元細胞提取物的細胞培養(yǎng)方法:
      1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
      ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
      ②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
      ③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
      ④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
      ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
      ⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
      2、細胞復蘇:
      ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
      ②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。
      3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
      ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)
      ②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;
      ③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞;
      ④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

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