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      人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤抑制蛋白(pRB)免疫組化試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟

      更新時(shí)間:2021-12-09      點(diǎn)擊次數(shù):930

      人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤抑制蛋白(pRB)免疫組化試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟:


      1.烤片: 將待做切片置于切片架上,于60℃恒溫烤箱中至少烤1 hr;石蠟包埋組織切片3~4μm 厚度


      2.脫蠟: 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次10 min;


      3.水化: 切片經(jīng)下行酒精水化,無水乙醇5min,95%乙醇2 次(每次2min),85%乙醇2 min;75%乙醇2min,自來水沖洗,ddH2O 洗2×2min;


      4.抗原修復(fù): 根據(jù)抗體說明書推薦方法進(jìn)行抗原修復(fù),常采用高壓、微波(溫度達(dá)到98~100℃)或酶消化修復(fù)法,室溫自然冷卻,自來水沖洗,ddH2O 洗2×2min,TBS 洗滌(2×2min)(具體修復(fù)方法見附1)* 注:有些抗原勿需修復(fù),直接進(jìn)入第5 步封閉。


      5.封閉: 滴加試劑B,37℃濕盒孵育30 min;


      6.加一抗:滴加用試劑C(即用型一抗),37℃濕盒孵育2 hr 或4℃過夜;


      7.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);


      8.封閉: 滴加試劑B,37℃濕盒孵育10 min;


      9.加二抗: 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗(試劑D),37℃濕盒中孵育30 min;


      10.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);


      11.封閉: 滴加試劑Tween 20,37℃濕盒孵育封閉20 min;


      12.加HRP-SA: 滴加用抗體稀釋液稀釋的試劑E(1:50~200,終濃度5~20 nM),


      37℃濕盒中孵育30 min;


      13.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min),TBS 洗滌(2×5 min);


      14.顯色:應(yīng)用DAB 溶液(試劑F)顯色;


      15.復(fù)染:自來水充分沖洗,復(fù)染,脫水,透明;


      16.封片: 待組織標(biāo)本干后,用試劑緩沖甘油封固劑封片;


      17.觀察成像: 顯微鏡下觀察成像。

      磷酸化有絲分裂激酶B/C抗體

      磷酸化腺泡Acinus蛋白抗體

      磷酸化腎上腺素能受體β2抗體

      APS抗體

      激活素受體樣激酶1抗體

      激活素A受體1B抗體

      磷酸化雄激素受體抗體

      磷酸化A-Raf抗體

      酰基鞘氨醇脫酰酶2抗體

      脂肪細(xì)胞特異性粘附分子抗體

      腺相關(guān)病毒5抗體

      腺苷酸活化蛋白激酶γ3抗體

      腺苷單磷酸活化蛋白激酶β2抗體

      磷酸化細(xì)胞周期末期促進(jìn)復(fù)合蛋白APC1抗體

      細(xì)胞周期末期促進(jìn)復(fù)合蛋白APC1抗體

      磷酸化蛋白激酶B2抗體

      磷酸化鐵蛋白Fe65抗體

      磷酸化鐵蛋白Fe65抗體

      磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體

      磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體

      磷酸化活化復(fù)制因子2抗體

      磷酸化活化復(fù)制因子2抗體

      磷酸化細(xì)胞周期末期促進(jìn)復(fù)合蛋白APC1抗體


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