丙酮酸（PA)含量測試盒微量法

實驗結(jié)果判斷我有妙招：

1、定量測定結(jié)果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。

2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2～3SD，作為陽性結(jié)果的閾值。

3、以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽性，P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑，P／N小于1．5為陰性。

4、ELISA試劑盒目測定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照，與陰性對照的顏色接近者，判定為陰性。

與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求：

① 易揮發(fā)、低燃點的試劑要密封，放于陰涼、通風、遠離火源處保存。

② 與水蒸氣，水發(fā)生反應的物質(zhì)要密封，并遠離水源保存。

③ 易與氧氣作用的試劑，應將其固體或晶體密封保存，不宜長期存放其水溶液，亞硫酸，氫硫酸溶液要密封存放，鉀，鈉，白磷更要采用液封形式。

④ 與二氧化碳反應的物質(zhì)要密封保存，其相應的溶液較固體更易反應，所以更要注意密封保存。

⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封，放于陰涼通風處保存。

本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!

商品介紹：

試劑組成和配制:

提取液：液體 100 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 5 mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑二：液體 15 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑四：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。

操作步驟：

1. 樣品的準備：

a. 細胞樣品的準備：收集細胞，用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品。

b. 組織樣品的準備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品。

d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒（P1511）測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。

e. 根據(jù)蛋白濃度和預計的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定，可以冰浴保存；如果當天不能完成測定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當天完成測定。

2. 試劑盒的準備工作：

a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測樣品(包括標準品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當混勻后再使用。

b. 反應啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋，即為反應啟動工作液。4℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

c. (可選做) SOD 標準品準備：需自備SOD標準品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標準品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品，但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。

25mL IEF Sample Buffer，4X,pH 3-7  IEF Sample Buffer，4X,pH 3-7  常溫保存

1mL Real-Time PCR稀釋液 Diluent for Real-Time PCR  -20℃保存

2 ug pLV-CMV-EGFP pLV-CMV-EGFP 低溫運輸，-20℃保存

布氏桿菌種子培養(yǎng)基  250g

1瓶 NCI-H446/VP細胞株 NCI-H446/VP 低溫運輸和保存

50次 DNA電泳分子量標準（100-600bp） DNAMETER 4℃保存

1g  Bacitracin 室溫避光保存

500mL Tris-HCl Buffer,1.0M,pH7.2   Tris-HCl Buffer,1.0M,pH7.2   常溫保存

1mg 重組蛋白L Recombinant Protein L -20℃保存

2 ug pUB6/V5 His lacZ pUB6/V5 His lacZ 低溫運輸，-20℃保存

50次 柱式昆蟲DNAout Column Insect DNAOUT 常溫

丙酮酸（PA)含量測試盒微量法Phospho-Jak1 (Tyr1022/1023)  磷酸化蛋白質(zhì)酪激JAK-1抗體 規(guī)格: 0.1mlRNF157  環(huán)指蛋白157抗體 規(guī)格: 0.2ml

KNL2/C14orf106  14號染色體開放閱讀框106抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-rat IgM/Cy7  Cy7標記的兔抗大鼠IgM 規(guī)格: 0.1ml

phospho-Alpha synuclein (Tyr136)  磷酸化核突觸蛋白α抗體 規(guī)格: 0.1mlPTPN11  蛋白酪磷酸2抗體 規(guī)格: 0.1ml

NGX6  鼻咽細胞相關基因6抗體 規(guī)格: 0.1mlCKAP2  細胞骨架相關蛋白2/瘤和微管相關蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

Acetyl-Histone H1b(K53)  乙酰化組蛋白H1b抗體 規(guī)格: 0.2mlRASGAP  RAS的GTP激活蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

CD158a/KIR2DL1  NK細胞抑制性受體2DL1抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-Guinea pig IgG/Cy3  Cy3標記的兔抗豚鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml

Goat Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488標記的羊抗豚鼠IgG 規(guī)格: 0.1mlAlpha s1 Casein  α-s1酪蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

CNTN4/AXCAM  軸突相關粘附分子抗體 規(guī)格: 0.2mlSalmonella enteritidis H  傷鞭毛抗原H抗體 規(guī)格: 0.2ml

Rabbit Anti-horse IgM/Cy5  Cy5標記的兔抗馬IgM 規(guī)格: 0.1mlMRGX1/MRGPRC/SNSR  G蛋白偶聯(lián)受體MRGX1抗體 規(guī)格: 0.1ml

X protein/HB-X (middle)  抗乙肝毒X蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlTRAILR1/DR4/APO2  死亡受體4抗體 規(guī)格: 0.1ml

Urocortin  尿皮質(zhì)素抗體 規(guī)格: 0.2mlRNF43  環(huán)指蛋白43抗體 規(guī)格: 0.2ml

MeCP2  甲基化CpG結(jié)合蛋白2抗體 規(guī)格: 0.1mlPectinesterase  果膠抗體 1ml